BIểU HIệN KHáNG NGUYÊN GRA7 CủA TOXOPLASMA GONDII TRONG Hệ THốNG PHI Tế BàO - Thuy, Nguyen Thi Dieu; Choe, Se-Eun; Kang, Seung-Won; Khoa, Đỗ Võ Anh (Tạp chí Khoa học Đại học Cần Thơ, 2013)
GRA7, protein kháng nguyên hạt dày đặc của Toxoplasma gondii- một loại ký sinh trùng máu ở động vật, đã được biểu hiện thành công protein tái tổ hợp ở các hệ biểu hiện khác nhau như E. coli, S. cerevesiae và Baculovirus. Trong nghiên cứu này, các kháng nguyên GRA7 của T. gondii được biểu hiện trong hệ thống phi tế bào. Gen mã hóa GRA7 T. gondii có kích thước phân tử 711 bp được tổng hợp hóa học dựa trên trình tự cDNA của gen GRA7 T. gondii. Cặp mồi đặc hiệu chứa vị trí nhận biết của BamHI và XhoI ở đầu 5'-đã được sử dụng để khuếch đại gen GRA7 từ vector pT7CEF1-Chis, sử dụng GFP là chuẩn dương tính. Kích thước phân tử và trình tự gen mã hóa GRA7 đã được xác nhận bởi enzyme cắt hạn chế BamHI và XhoI và đọc trình trình tự. Quá trình biểu hiện được tiến hành với hai bước phiên mã và dịch mã. Kết quả RT-PCR sử dụng mồi đặc hiệu gen mã hóa GRA7 đã khuếch đại gen đích với kích thước phân tử phù hợp. Hình ảnh lai Western blott thấy xuất hiện băng kích thước khoảng 29 kDa tương ứng với trọng lượng phân tử của protein GRA7. Kết quả ELISA dương tính sử dụng kháng thể đa dòng lợn kháng T. gondii và cộng hợp HRPO với độ pha loãng kháng nguyên GRA7 trong khoảng1/ 1.000 -1/ 4.000x xác nhận sự biểu hiện thành công của GRA7 trong hệ thống tổng hợp protein phi tế bào.